开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素（如破伤风梭菌、黄曲霉毒素）的实验室需单独使用，以便控制传播。
（一）洁净实验室 1.洁净室的布局 根据样品检验要求，一般应至少包括更衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检查室、阳性菌室和物流通道。 更衣系统应至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、缓冲以及人流走廊等。 物流通道应考虑净污分流的布局，有条件的可设置污物走廊。
2.洁净室的设计要求
净化级别：洁净走廊、检查室、阳性菌室应为一万级，其他房间应为十万级 。
气流组织：阳性菌室对走廊呈负压，走廊对缓冲有5Pa的正压；阳性菌室全排风电气控制，控制开关外置，设置通讯系统。
3.结构与要求
无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过2.4m，由两个缓冲间、操作间组成。操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）''用于空气消毒。紫外线波长200－300nm具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW•cm-21m距离。其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。
4.温度、湿度
无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度最好控制在25±2℃，相对湿度40－60％。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。
5.操作间
无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。
洁净度要求：净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。 操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器 等。微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（精度为0.1g，最大称量为300g为宜），电动匀浆仪等。
6.缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，消毒液，无菌衣，帽，口罩，拖鞋等，缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。
（二）洁净室的使用 1.在实验开始之前1小时启动风机系统（空调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭； 2.观察并确保洁净室的压差； 3.物品经物流通道进入洁净室； 4.人员正确着装后经人流通道进入洁净室； 5.使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。
（三）洁净室的清洁维护 1.洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护； 2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后； 3.定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次； 4.不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时。
（四）洁净室的验证 1.验证的项目：
洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度
2.验证的技术要求 验证项目 十万级 一万级 一百级 温度（℃） 18-26 20-24 20-24 相对湿度（%）45-65 45-60 45-60 换气次数（次/h）不小于15 不小于25 压差（pa）相对室外 10有级差的洁净室之间
照度（Lx）主要 工作室≥300 辅助工作室≥150 悬浮粒子数（粒/m3）≥0.5um 3500000 350000 3500 ≥5um 20000 2000 0 浮游菌数（个/ m3） 500 100 5 沉降菌（个/皿） 10 3 1
3.验证的周期 建议每半年一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验证次数。
4.验证的方法 洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-2010，其他项目：参照JGJ71－90。
